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乳酸是糖无氧氧化(糖醇解)的代谢产物。乳酸产生于骨路,机内,脑和红细胞,经肝脏代谢后由月分泌排泄,血乳酸测定 可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量不足,乳酸水平的增高 可见于多种临床疾病。
标本处理:
1. 血清(浆):直接测定,如超过线性范围用生理盐水稀释后测定。
2. 培养液样本:吸取培养液,1000 转/分,离心 10-15 分钟,取上清测定。
3. 组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的匀浆介质,冰水浴条件下匀浆,25000 转/分,离心 10-15 分钟,取上清测定.
4. 细胞样本:
a. 细胞收集:将制备好的细胞悬液取出,1000 转/分,离心 10-15 分钟,弃上清液,取细胞沉淀;用等渗缓冲液(推荐 0.1mol/L、PH7-7.4 磷酸盐缓冲液)清洗 1-2 次,同样 1000 转/分,离心10-15 分钟,弃上清液,取细胞沉淀。
b. 细胞破碎:采用裂解液裂解,裂解好的液体不离心直接测定。 试剂组成及配制:
试剂一: 酶稀释液 60mL×1 瓶, 2℃ ~ 8℃保存 。
试剂二: 酶贮备液 0.6mL×1 支, 2℃~8℃保存,
酶工作液配制:临用前将试剂二(酶贮备液)和试剂一(酶稀释液)按照 1:100 的体积比进行混合,现用现配、2℃~8℃保存 24 小时内有效
试剂三:黄色透明液体 6mL×2 瓶,2℃~8℃避光保存,
试剂四:粉剂×2 支,短期(1 个月内)使用可放 4℃~8℃冰箱,长期存放请置-20℃以下。(注:粉剂量较少可能附着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时可将其 4000 转离心 2 分钟)
显色剂的配制:取 1 瓶试剂三,转移 1mL 进入一支四粉剂中,反复顺倒离心管混匀,待粉剂溶解后,再用微量移液器将离心管中的液体转移到瓶中,再从试剂三中移出 1mL 到原试剂四离心管中,如此反复 2~3 次,使二者充分混合溶解,配成显色剂,2C~8℃游光保存 2 周内有效。
试剂五:终止液,60mL×2 瓶,2℃~8℃保存。
试剂六:3mmol/L 标准品,2mL×1 支,2℃~8℃保存。