活性氮（reactive nitrogen species）是指 NO 与包括活性氧在内的化合物相互作用,衍生出一系列包括 ONOO 及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物。活性氮具有阻止癌转移和促进癌细胞分化的作用，在人体多个系统发挥重要作用，并与多种重大疾病的发生发展相关，在治疗心血管疾病和许多其他重大的慢性疾病中具有重要作用。

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集：应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明，收集样品后直接检测，不需要其他处理。

2. 细胞培养液、上清样品收集：取细胞培养上清液 500ul，4 度，5000rpm 离心10 分钟，取上清，样品直接检测，不需要其他处理。

3. 细菌/细胞的收集:收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清,按照 500 万细菌或细胞加入1mL 提取液的比例，用超声波破碎细菌或细胞，5000g 4℃离心 15 分钟，取上清，置冰上待测。

4. 组织样品收集：将组织块用 PBS 漂洗干净，称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，5000g4℃离心 15 分钟，取上清，置冰上待测，待测样本应尽早检测，2-8℃保存 48 小时；更长时间须冷冻（-20℃以下）保存，避免反复冻融。 检测程序:

1. 加 样：微孔板中分别加入对照品及待测样品 50ul，加入反应液 100ul，室温灯光下反应10分钟。

2. 加显色液：每孔加入显色液 100ul，室温灯光下反应 5 分钟（显色结果根据反应情况而定，当对照品和空白孔颜色差异明显时，即可，在 5 分钟内读数）。

3. 读 数：将反应好的微孔板用酶标仪在 560nm 处读 OD 值。

结果判断与计算：

1、 检测结果判断，OD 值的大小和 RNS 的含量成反比，当检测样品的值低于空白孔的值时，说明此样品中RNS 的含量较低或样品中受其它物质含量的影响交大，舍弃此样品或更换其它检测方法。

2、 根据下列公式计算出样品中 RNS 的含量，单位：mol/L。